Кръводаряване

октомври 8, 2009

Индиректен метод на Кумбс

Забелязвам, че всеки ден някой се озовава в нашия блог, търсейки информация за „положителен индиректен Кумбс”. Понякога са и по двама-трима, а някои търсят информация за „Кумпс”. Затова сега ще обясня какво означава това и какво търсим чрез този метод.

Индиректния метод на Кумбс се нарича още индиректен антиглобулинов тест – ИАГТ. Чрез този метод се търсят антитела от клас IgG в нечий серум. Например чрез този метод установяваме дали бременна жена е образувала антитела срещу еритроцитни антигени на плода си, дали пациент, който е многократно кръвопреливан не е образувал антитела срещу антигени, които липсват в неговите еритроцити и т.н.
Ако тестът е положителен – значи има антитела.

Необходим ни е серум, който да тестваме и тест-еритроцити, т.е. еритроцити с познат фенотип.
Ето в какво се състои методът. Първоначално измиваме трикратно еритроцитите, за да отстраним всякакви остатъци от плазма. След това правим суспенсия на еритроцитите в разтвор с ниска йонна сила – LISS. Този разтвор благоприятства свързването на IgG антителата. Слагаме в епруветка две капки от серума, който ще тестваме и два капки от еритроцитната суспенсия. Инкубираме 15 минути на 37°С. Така даваме възможност на антителата от серума (ако ги има) да се свържат с антигените на тест-еритроцитите.
След като изтече инкубацията, измиваме трикратно еритроцитите, така че да отмием серума. Ако е имало антитела, те остават здраво свързани за еритроцитите и не се отмиват. За да визуализираме това, добавяме капка АГС – антиглобулинов серум – и отново центрофугираме, този път на 1000 оборота, за да улесним реакцията на АГС с антителата, които са захванати за еритроцитите (пак ако ги има, то е ясно). Всъщност АГС представлява антитела срещу антителата. Ако има антитела, захванати за антигените на еритроцитите, АГС се захваща за тях и това води до аглутинация на еритроцитите, която се вижда с просто око.
IAGT
Така отчитаме положителния индиректен Кумбс.
След като сме установили, че имаме положителен Кумбс, т.е. имаме антитела, следва да установим какъв е титърът им и най-важното: да идентифицираме антителата. Най-често антителата са от системата Rh. Но естествено, може и да са от друга система.

Самото идентифициране представлява повторение на този метод с различни видове тест-еритроцити и после нещо като решаване на задачата с хората от различни националности, които живеели в къщи с различни цветове и пушели различни марки цигари, сещате се – популярен вид логически задачи.
За да улесним идентифицирането, още в началото правим ИАГТ с два вида еритроцити:
О (-) с фенотип ссdееКк
О (+) с фенотип СсDЕекк.
Това е нещо като минипанел и дава някои отговори: ако имаме реакция с О (+), а нямаме с О (-) при Rh отрицателен пациент, тогава най-вероятно се касае за анти-D антитела. Но може също да са анти-Е или анти-С.
Ако имаме положителен индиректен Кумбс с О (-), а нямаме с О (+), би трябвало да е анти-К антитяло.
Ако има положителен ИАГТ и с двата вида тест-еритроцити, антитялото може да е анти-с или анти-е или анти-к.

За да разберем за какво става въпрос, първо правим фенотип на еритроцитите на пациента, когото изследваме. След това подбираме тест-еритроцити с различни антигени, които той няма. Защото имунни антитела могат да се образуват само срещу антигени, които липсват в собствените еритроцити, нали така.

Ако отхвърлим системите Rh и Kell, тръгваме да търсим антитела от други системи: MNSs, Duffy, Kidd и т.н. Тогава вече става доста сложно и ужасно скъпо. Но това се случва рядко.

Вашият коментар »

Все още няма коментари.

RSS feed for comments on this post. TrackBack URI

Вашият коментар

Попълнете полетата по-долу или кликнете върху икона, за да влезете:

WordPress.com лого

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Промяна )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Промяна )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Промяна )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Промяна )

Connecting to %s

Create a free website or blog at WordPress.com.

%d bloggers like this: